色谱分离原理
液相色谱法按分离机制的不同分为液固吸附色谱法、液液分配色谱法(正相与反相)、离子交换色谱法、离子对色谱法及分子排阻色谱法。
1.液固色谱法 使用固体吸附剂，被分离组分在色谱柱---离原理是根据固定相对组分吸附力大小不同而分离。分离过程是一个吸附-解吸附的平衡过程。常用的吸附剂为硅胶或氧化铝，粒度5~10μm。适用于分离分子量200~1000的组分，大多数用于非离子型化合物，离子型化合物易产生拖尾。常用于分离同分异构体。
2.液液色谱法 使用将特定的液态物质涂于担体表面，或化学键合于担体表面而形成的固定相，分离原理是根据被分离的组分在流动相和固定相中溶解度不同而分离。分离过程是一个分配平衡过程。
涂布式固定相应具有---的惰性;流动相必须预先用固定相饱和，以减少固定相从担体表面流失;温度的变化和不同批号流动相的区别常引起柱子的变化;另外在流动相中存在的固定相也使样品的分离和收集复杂化。由于涂布式固定相很难避免固定液流失，现在已很少采用。现在多采用的是化学键合固定相，如c18、c8、---柱、基柱和柱。
制备液相色谱仪的功能： 泵形式：串联双柱塞浮动式密封圈。 泵头自冲洗功能。 “自吸式单向阀”技术，可延长密封圈使用寿命。 程序化的溶剂类和压缩因子，可自动补偿。 完整的预清洗功能，更于快速溶剂更换。 制备液相色谱仪主要用于以下领域： 1、天然化学、中药化学：这是国内目前广泛的使用方法，为了弄清楚植物中的微量有效成分，开放手工色谱柱早已不够用了，几乎每个搞天然药化的实验室都至少有一台液相，土豪实验室人手一台液相。 2、蛋白纯化：相对于前者，蛋白纯化的起步要稍微晚一点，但是发展很迅速。同时，由于外国仪器厂家在这个领域的优势不算太大，液相分离，目前国内也在这个领域加快发展，抢占地盘。 3、杂质纯化：由于合成工艺并不能做到100%的产率，往往伴有副产品，如何获得微量的杂质并确定结构和含量，这就得靠液相色谱。 4、手性化合物的制备：这个主要是有机合成和方法学的在用。
液相色谱系统的结构及功能说明： 液相色谱系统一般由溶剂输送系统、进样系统、分离系统（色谱柱）、检测系统和数据处理与记录系统组成，具体包括储液器、输液泵、进样器、色谱柱、检测器、记录仪或数据工作站等几部分。其中输液泵、色谱柱和检测器是hplc仪的关键部分。 1、溶剂输送系统： 储液器：用来贮存数量足够、符合要求的流动相。配有溶剂过滤器，以防止流动相中的颗粒进入泵内。 脱气器：脱气的目的是为了防止流动相从色谱柱内流出时释放出气泡进入检测器，从而引起噪声，不能正常检测。 输液泵：将储液器中的流动相连续不断地以高压形式进入液路系统，使样品在色谱柱中完成分离过程。 梯度洗脱装置：是在分离过程中通过逐渐改变流动相的组成增加洗脱能力的一种装置。 2、进样系统： 进样器：是将样品送入色谱柱的装置，进样方式可以分为两种：阀进样或自动进样。比较常用的是采用自动进样器装样。 3、分离系统： 色谱柱：对样品进行分离，是整个色谱系统的---，它的优劣直接影响到分离的效果。 4、检测系统： 检测器：将色谱柱连续流出的样品组分转变成易于测量的电信号，被数据系统接收，得到样品分离的色谱图。 5、数据处理和记录系统： 对色谱数据进行处理，并参与hplc仪器的自动控制。
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