液相色谱法开始阶段是用大直径的玻璃管柱在室温和常压下用液位差输送流动相,称为---液相色谱法,制备液相,此方法柱效低、时间长(常有几个小时)。液相色谱法(high performance liquid chromatography,hplc)是在---液相色谱法的基础上,于60年代后期引入了气相色谱理论而迅速发展起来的。也称现代液相色谱。
hplc的特点和优点
hplc有以下特点:
高压—压力可达150~300kg/cm2。色谱柱每米为75 kg/cm2以上。
高速—流速为0.1~10.0 ml/min。
—可达5000塔板每米。在一根柱中同时分离成份可达100种。
高灵敏度—紫外检测器灵敏度可达0.01ng。同时消耗样品少。
制备液相色谱仪是近30年发展起来的一种具有高灵敏度、高选择性的快速分离分析技术。它既能用于微量组分的分析测定,又能用于大量的制备分离,灵活多样,其应用范围已超过其他各种分离方法,尤其在中药样品的分析分离方面更充分发挥它的特长,为推动该领域的进步和发展作出了---贡献。 根据用途和泵配置的不同,一般可以将常见的实验室级别lc分为以下几种:分析型液相色谱仪(hplc),半制备液相色谱仪(semi-prephplc)和制备型液相色谱仪(prep-hplc)以及中压液相色谱仪(mplc)。这三者的原理基本一样,不同之处主要在于泵的大流速,一般而言,分析型hplc的大流速为10.00ml/min,半制备hplc为50ml/min,制备hplc为100ml/min,中压液相色谱更高。而由于泵流速的升高,流通池的光程、体积,管道的内径,六通阀、定量环等零件也会相应改变;并且,根据实验室的需要,可以增加自动接收1器等配件。
色谱柱是hplc系统非常关键的一部分,随着色谱技术的发展,它也不断地更新换代,长度变得越来越短,填料颗粒也越来越细。现在常用的色谱柱长度在30~250 mm,颗粒直径在1.6~5μm。颗粒类型主要有全多孔和表面多孔,全多孔填料具有的柱容量、更多键合相选择的优点,表面多孔具有反压低、峰形好的优点。的基质是硅胶。以前填料纯化技术不是很成熟,十八烷基键合到硅胶表面不是很完全,硅胶上总是少量的硅---在外面。这样就造成样品在进行色谱分离的时候,会吸附或者键合在这部分硅---上,导致色谱峰拖尾。使用三---作为封尾剂,与硅---吸附,可以使峰型---,这个三---曾经一度成为分析界的宝贝和。现在,制造填料的技术日趋成熟,人们已经掌握了把这部分剩余未键合硅胶也进行键合钝化的技术,这个技术就叫作封尾。
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