超液相色谱仪的分类: 色谱分析法有很多种类,---同的角度出发可以有不同的分类方法。 从两相的状态分类: 色谱法中,流动相可以是气体,也可以是液体,由此可分为气相色谱法(gc)和液相色谱法(lc)。固定相既可以是固体,也可以是涂在固体上的液体,由此又可将气相色谱法和液相色谱法分为气-液色谱、气-固色谱、液-固色谱、液-液色谱。 另外,还有一种超临界流体色谱法,超临界流体色谱是值用超临界流体做流通相,以固体吸附剂(如硅胶)或键合到载体(或毛细管壁)上的高聚物为固定相的色谱法。超临界流体是在高于临界压力和临界温度时的一种物质状态,它既不是气体也不是液体,但兼有气体和液体的某些性质。
色谱又称色层法或层析法,是一种物理化学分析方法,它利用不同溶质(样品)与固定相和流动相之间的作用力(分配、吸附、离子交换等)的差别,当两相做相对移动时,各溶质在两相间进行多次平衡,使各溶质达到相互分离。1906年tswett 研究植---素分离时提---谱法概念;他在研究植物叶的色素成分时,将植色谱物叶子的萃取物倒入填有碳酸钙的直立玻璃管内,然后加入使其自由流下,高压制备,结果色素中各组分互相分离形成各种不同颜色的谱带。按光谱的命名方式,这种方法因此得名为色谱法。以后此法逐渐应用于无色物质的分离,“色谱”二字虽已失去原来的含义,但仍被人们沿用至今。在色谱法中,静止不动的一相(固体或液体)称为固定相(stationary phase) ;运动的一相(一般是气体或液体)称为流动相(mobile phase)。
反相色谱影响因素(1)柱长有机小分子和肽类的分辨率随柱长的增加而增加.但是柱长增加并不能使蛋白质和---等生物大分子的分辨率---增加.它们在较短的柱子上往往也有---的分离效果。(2)流动相的流速。有机小分子和肽类的分辨率对流动相流速非常敏感。而蛋白质和---等生物大分子的分辨率则不然。流速越小,柱子越长,色谱峰的宽度就越大,分辨率就越小。制备色谱上样过程中的流速对动态吸附容量影响很大。(3)温度。温度上升,流动相黏度下降,流动速度加快,且流动相与固定相之间的传质速度加快,使分辨率增加。同时,温度上升,分子热运动增加,疏水性作用减弱。升高温度要考虑目标物质的热稳定性。(4)流动相组成。流动相的极性越大,溶质的分配系数越大,洗脱时间越长。rpc多采用降低流动相极性(水含量)的线性梯度洗脱法。水是极性强的溶剂,在反相色谱中常常和基础溶剂配合使用,向流动相中加入不同浓度的、可以与水混溶的有机溶1剂,以得到不同强度的流动相,这些有机溶1剂称为修饰剂。反相色谱中的有机溶1剂。此外,---、---呋1喃、---1醇及二氧六环也常被用作修饰剂。有机溶1剂梯度的大小也会影响分辨率,一般梯度越小,分辨率越大。
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