色谱柱是hplc系统非常关键的一部分，随着色谱技术的发展，它也不断地更新换代，长度变得越来越短，填料颗粒也越来越细。现在常用的色谱柱长度在30～250 mm，颗粒直径在1.6～5μm。颗粒类型主要有全多孔和表面多孔，全多孔填料具有的柱容量、更多键合相选择的优点，表面多孔具有反压低、峰形好的优点。的基质是硅胶。以前填料纯化技术不是很成熟，十八烷基键合到硅胶表面不是很完全，硅胶上总是少量的硅---在外面。这样就造成样品在进行色谱分离的时候，会吸附或者键合在这部分硅---上，导致色谱峰拖尾。使用三---作为封尾剂，与硅---吸附，可以使峰型---，这个三---曾经一度成为分析界的宝贝和。现在，制造填料的技术日趋成熟，人们已经掌握了把这部分剩余未键合硅胶也进行键合钝化的技术，这个技术就叫作封尾。
色谱法的分离方法，有柱色谱法、纸色谱法、薄层色谱法、气相色谱法、液相色谱法等。色谱所用溶剂应与试样不起化学反应，并应用纯度较高的溶剂。色谱时的温度，除气相色谱法或另有规定外，层析泵，系指在室温下操作。分离后各成分的检出，应采用各单体中规定的方法。通常用柱色谱、纸色谱或薄层色谱分离有色物质时，可根据其色带进行区分，对有些无色物质，可在245-365nm的紫外灯下检视。纸色谱或薄层色谱也可喷显色剂使之显色。薄层色谱还可用加有荧光物质的薄层硅胶，采用荧光熄灭法检视。用纸色谱进行定量测定时，可将色谱斑点部分剪下或挖取，用溶剂溶出该成分，再用分光光度法或比色法测定，也可用色谱扫描仪直接在纸或薄层板上测出，也可用色谱扫描仪直接以纸或薄层板上测出。柱色谱、气相色谱和液相色谱可用接于色谱柱出口处的各种检测器检测。柱色谱还可分部收集流出液后用适宜方法测定。
随着固定相的发展，有可能在充分保持生化物质活性的条件下完成其分离。液相色谱仪成为解决生化分析问题有前途的方法。由于液相色谱仪具有高分辨率、高灵敏度、速度快、色谱柱可反---用，流出组分易收集等优点，因而被广泛应用到生物化学、食品分析、研究、环境分析、无机分析等各种领域。液相色谱仪与结构仪器的联用是一个重要的发展方向。质谱连用技术受到普遍重视，如分析------酯和多核芳烃等，液相色谱仪连用也发展很快，如在环境污染分析测定水中的烃类，海水中的不挥发烃类，使环境污染分析得到新的发展。液相色谱仪的维护与维修 ，液相色谱仪常见故障与排除方法 ： 泵：单向阀 现象：柱压波动范围很大。原因：单元向阀污染或阀内进入气泡引起。污染使得球与阀座密封不严，液流倒流，压力不稳，或球与阀座粘在一起阻死。气泡进入阀中会紧贴在阀体的一侧，使球难以返回到阀座，引起倒流，使压力和流速变化范围大，有时甚至为零。措施：对于污染用不同极性的一系列溶剂冲洗有可能解决问题，如用25ml水依次冲洗。或拆下进出单向阀放在10%的液内超声清洗30~60min，若仍不解决问题则要更换单元向阀。对于阀内进入气泡不必弄清气泡存在何处，只要打开泄液阀大流速冲洗就可解决问题，在冲洗泵时可用扳手迅速打开泵头上的输出管路，以促进气泡排出。
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