液相色谱法开始阶段是用大直径的玻璃管柱在室温和常压下用液位差输送流动相,液相色谱,称为---液相色谱法,此方法柱效低、时间长(常有几个小时)。液相色谱法(high performance liquid chromatography,hplc)是在---液相色谱法的基础上,于60年代后期引入了气相色谱理论而迅速发展起来的。也称现代液相色谱。
hplc的特点和优点
hplc有以下特点:
高压—压力可达150~300kg/cm2。色谱柱每米为75 kg/cm2以上。
高速—流速为0.1~10.0 ml/min。
—可达5000塔板每米。在一根柱中同时分离成份可达100种。
高灵敏度—紫外检测器灵敏度可达0.01ng。同时消耗样品少。
制备型加压液相色谱,按照色谱柱和样品量的大小,分为:(1)低压液相色谱;(2)中压液相色谱;(3)高压液相色谱;(4)快速色谱。低压、中压与高压液相色谱的压力范围之间会存在一定交叠,没有统一、明确的标准。 快速色谱柱压通常为2bar(或30psi)左右,对于那些容易分离的简单混合物,由于快速色谱具有操作简便、经济等优点,常常是实验室的---。但快速色谱不同于一般的层析分离,这种分离没有压力,而快速分离通常使用瓶装氮气加压,使流动相具有一定的流速,从而缩短了分离时间。 快速色谱使用的柱子一般是玻璃柱,柱直径为3~10cm.长度为7~15cm。快速色谱中使用广泛的固定相为硅胶。采用的粒径通常为:25~40μm,40~63μm或63~200μm的球形固定相。其它如键合相、氧化铝、聚---吸附剂也常用作快速色谱的固定相使用。
国产液相色谱仪借助于hplc(液相色谱)的理论及原理,涵盖了小颗粒填料、低系统体积、耐高压及快速检测手段等全新技术,增加了分析的通量、灵敏度及色谱峰容量。 国产液相色谱仪的应用范围: 可分析极性、弱极性或非极性的有机化合物,热稳定性差的化合物以及具有生物活性的生物分子。广泛应用于---、肽类、内酯、稠环芳烃、高聚物、、人体代谢产物、表面活性剂、杀虫剂、除莠剂等物质的定性和定量分析。例如、多环芳香化合物、甾体化合物、、色素、防腐剂、有机酸、---、糖类、蛋白质、---酸、肽、酶等,还可进行样品的纯化、手性的拆分等。
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