随着柱填料的快速发展，反相色谱法的应用范围逐渐扩大，现已应用于某些无机样品或易解离样品的分析。为控制样品在分析过程的解离，常用缓冲液控制流动相的ph值。但需要注意的是，c18和c8使用的ph值通常为2.5~7.5(2~8)，太高的ph值会使硅胶溶解，太低的ph值会使键合的脱落。有报告新商品柱可在ph 1.5~10范围操作。
正相色谱法与反相色谱法比较表
正相色谱法 反相色谱法
固定相极性 高～中 中～低
流动相极性 低～中 中～高
组分洗脱次序 极性小先洗出 极性大先洗出
液相色谱仪是属于易学难用的仪器，---讲究“正确使用”和经验。液相---接触多的是流动相，流动相也是造成液相色谱各种问题的主要源头。液相色谱常见的故障一是堵，二是漏。下面就这两分别展开讨论（流动相以甲1醇为例，色谱柱以c18为例） 。
为何会堵?
“堵”的表现现象就是柱压异常升高，直接原因就是流路不畅。堵塞的主要位置就是在色谱柱的前端，主要原因就是流动相里有杂质，杂质的主要来源就是---。
如何预防液相色谱仪液相泵的故障： 要保持泵的---操作性能，必须维护系统的清洁，液相分离，---溶剂和试剂的，对流动相进行过滤和脱气.下面列出预防泵故障的几项措施： 1、用高试剂和hplc级溶剂； 2、过滤流动相和溶剂； 3、脱气； 4、每天开始使用时放空排气，工作结束后从泵中洗去缓冲液； 5、不让水或腐蚀性溶剂滞留泵中； 6、定期更换垫圈； 7、需要时加润滑油； 8、查阅有关泵操作手册中的其它建议。 处于---操作状态的泵，应该能使色谱图上的基线平稳；保留时间的重复性好。在等度洗脱时压力波动小于2%。梯度洗脱时压力变化应是缓慢和平稳的。 为了使故障发生后尽除，平时应常备密封、单向阀、泵头装置、各式接头、保险丝等部件，以及更换工具。
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